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MET扩增是非小细胞肺癌（NSCLC）的致癌驱动基因变异，同时也是EGFR-TKI的获得性耐药机制之一。初诊患者发生率约1-5%^[1]，局晚期NSCLC患者EGFR-TKI耐药后，约有5-50%会发生MET扩增。NGS技术在MET扩增中的应用已经得到临床广泛认可，但仍然缺乏与金标准荧光原位杂交（FISH）检测的前瞻性大样本验证结果。

四川大学华西医院王威亚教授团队与威尼斯9499登录入口合作开展了国内首个前瞻性、多中心、大样本MET扩增对比研究，在世和一号^®大Panel检测的基础上，进一步通过世和自主研发的MET分析算法，实现了MET扩增结果的GCN转化，并同步区分MET局部扩增和多体，检测结果与金标准FISH高度一致。研究成果已于近日发表在了Lung Cancer ^[2]上。

研究设计

本研究共纳入116例EGFR-TKI治疗耐药患者的组织样本，进行世和一号^®大Panel和FISH检测。其中34例经过1,2-代EGFR-TKI治疗，82例经过3代EGFR-TKI治疗。

FISH检测，MET扩增阳性定义为MET GCN≥5或MET/CEP≥2.0，MET局部（focal）扩增定义为MET GCN≥5且MET/CEP≥2.0；MET多体（polysomy）扩增定义为MET GCN≥5且MET/CEP<2.0。

诊断性能计算时，组织和血浆均分为2个亚组，一组将MET局部扩增和多体都判断为MET扩增阳性，一组仅将MET局部扩增判断为MET扩增阳性。以FISH检测结果作为参照，计算四个亚组中NGS和FISH检测的一致性（OPA）、灵敏度（PPA）和特异性（NPA）。同时通过ROC曲线优化NGS检测最佳阈值，以特异性>90%选择最佳灵敏度确认阈值。

图1. 研究设计流程图

研究结果

所有患者，FISH检测MET扩增阳性率37.1%（43/116）。1,2-代EGFR-TKI耐药后阳性率23.5%（8/34），3代EGFR-TKI耐药后阳性率42.7%（35/82），与既往文献报道一致。3代EGFR-TKI耐药后22.0%（18/82）的患者MET GCN≥10个拷贝。

NGS和FISH平行检测116例患者组织样本。根据临床阈值GCN≥5的结果，MET局部扩增检测的一致性为90.72%。通过生信算法及ROC曲线优化，确定NGS最佳阈值为GCN≥6.55，优化后可排除多体检出的干扰。

表1. 组织NGS和FISH检测对比结果

1,2-代EGFR-TKI耐药后以FISH GCN≥5.0作为阳性判断标准，3代EGFR-TKI耐药后以FISH GCN≥10.0作为阳性判断标准。通过生信算法及ROC曲线优化，以特异性>90%及有最高检测一致性可能确定最佳阈值。1,2-代EGFR-TKI最佳阈值GCN≥4.0，3代EGFR-TKI最佳阈值GCN≥7.535。相比合并1,2,3-代EGFR-TKI计算，两组一致性均超过91%，灵敏度增加30%-45%。

表2. 相比原始阈值，使用最佳阈值的NGS诊断性能

临床价值

1. 本研究是国内首个前瞻性、多中心、大样本的MET准确性验证。研究结果证实，NGS检测MET局部扩增结果与FISH高度吻合。

2. 研究聚焦临床真实应用场景，前瞻性收样，EGFR-TKI治疗耐药后更容易发生MET扩增，入组患者100%经过EGFR-TKI治疗，数据均来源于临床真实世界，循证级别更高。

3. 研究发现，优化后NGS最佳阈值GCN≥6.55可排除多体检出的干扰。进一步区分1,2-代EGFR-TKI及3代EGFR-TKI后，分别确定最佳检测阈值，能获得更好的检测性能。提示临床实践中，检测前需要综合考虑临床治疗特征，以更好地匹配检测方法及判断标准。

4. 研究通过生信算法及ROC曲线优化，以特异性>90%及有最高检测一致性可能确定最佳阈值，极大改善了检测一致性和灵敏度，证明了NGS是MET扩增检测的有效补充手段，为NSCLC临床检测方法的选择提供了高级别循证依据。

参考文献