MET是NSCLC精准治疗的重要靶点之一。MET异常主要包括MET基因14外显子跳跃突变、MET扩增和c-MET蛋白过表达三种类型，其中MET扩增已成为NSCLC患者靶向药物耐药后治疗的重要分子标志物，如何准确检测MET扩增，以指导MET抑制剂治疗，是目前临床关注的重点。本期我们将着重介绍MET扩增，帮助大家更全面地了解MET扩增及其临床检测需求。
MET扩增的概念及其临床意义
MET扩增是指MET基因的拷贝数（GCN）增加，包括多体（Polysomy）和局部扩增（Focal Amplification）两种形式（图1）。
图1. 多体是指整条染色体重复，即细胞中出现多条7号染色体，除MET基因外，位于7号染色体上的其它基因（如EGFR、BRAF等）的拷贝数也一并增加；局部扩增仅MET基因或合并周围区域的拷贝数增加，而位于染色体其他区域基因的拷贝数没有明显变化。
MET多体和局部扩增两种形式都可能导致MET mRNA转录水平上调，增加c-MET蛋白表达[1]。但相对于多体，局部扩增更容易成为驱动因素，使得c-MET蛋白表达升高、受体激活和下游信号通路活化[2]。甚至亚洲胸部肿瘤研究组 (ATORG) 在关于NSCLC MET变异的专家共识中指出，多体不是致癌驱动因素[3]。
MET扩增在多种实体肿瘤中均有发现，可作为原发性肿瘤驱动基因变异之一。其中，NSCLC中原发MET扩增的发生率为1-5%，与不良预后相关。另一方面，MET扩增更常继发于其他驱动基因（如EGFR、ALK）阳性的NSCLC患者靶向治疗后，是EGFR-TKI和ALK-TKI耐药的重要机制之一（图2）。当EGFR（或ALK）信号通路被EGFR-TKI（或ALK-TKI）抑制时，作为旁路信号途径，继发性MET扩增将绕过EGFR（或ALK），激活下游通路，从而导致耐药发生。
图2. NSCLC中MET扩增的发生率和临床意义[1]
此外，MET扩增水平和MET抑制剂疗效呈正相关，即MET扩增水平越高，使用MET抑制剂效果越好（图3）。
图3. 高水平MET扩增的患者接受MET抑制剂治疗疗效更好，肿瘤缓解率更高[2]
随着MET靶向药在国内上市，MET抑制剂的可及性大大提高，晚期初治和EGFR‐TKI或ALK-TKI等靶向药物耐药后的NSCLC患者，应尽早进行相关检测，让更多MET高倍扩增患者从靶向治疗中获益。
MET扩增的检测方法有哪些？
目前MET扩增的检测方法主要包括原位杂交（FISH）和高通量测序（NGS）。
FISH检测
FISH通过荧光探针原位标记MET基因，可以直接借助显微镜观察单个肿瘤细胞中MET荧光信号的数量，荧光信号的数量即代表了MET基因的拷贝数；也可以通过标记MET基因和第7号染色体着丝粒（CEP7），计算肿瘤细胞中MET/CEP7比值。
FISH检测MET扩增尚无统一的判读标准，目前临床主要参考UCCC和Cappuzzo标准，通过MET GCN和MET/CEP7比值来进一步区分局部扩增和多体。当MET/CEP7≥2时，判断为局部扩增；当MET GCN≥5且MET/CEP7<2时，判断为多体（图4）。
图4 MET局部扩增和多体的FISH检测判断标准[2]
NGS检测
NGS可根据测序深度和特定位点变异频率等信息，对检测到的MET基因拷贝数变异（CNV）进行计算。它还可以通过评估7号染色体上的其他基因（如MET相邻基因LINC01510和CAPZA2），以及其他染色体的测序深度和分布特征，来识别局部扩增和多体（图5）。
目前，通过NGS计算CNV来判断MET扩增尚无统一标准，定义MET扩增的阈值具有较大异质性，既往多项研究使用MET GCN > 3-5为阈值[4-5]。鉴于NGS检测结果的准确性和临床用药的指导性，建议临床选用经国家药监局（NMPA）批准或经充分验证的NGS产品对MET扩增进行检测，且检测结果能够明确区分局部扩增和多体。
图5. NGS检测识别MET局部扩增和多体 [2]
NGS与FISH结果高度一致
关于NGS与FISH检测肿瘤组织MET局部扩增的结果对比，既往研究也显示出了较高的一致性。
TATTON研究中，组织NGS与FISH检测MET局部扩增的阳性一致性高达88%[6]。在今年的WCLC世界肺癌大会上，威尼斯9499登录入口公布了一项与华西医院王业教授团队合作的研究成果：在中国NSCLC患者中，组织NGS与FISH检测MET扩增的总体一致性达83.6%；针对MET局部扩增，组织NGS检测的敏感性和特异性分别为78.6%和100%，与FISH检测的整体一致性高达94.6%[7]。
组织NGS检测MET扩增，不仅能有效区分局部扩增和多体，针对其中具有临床用药指导价值的MET局部扩增，检测结果与FISH高度一致。
NGS报告解读注意事项
由于NGS检测Panel和生物信息分析策略的不同，MET扩增检测结果的呈现形式也可能不同。目前大多数NGS报告中，MET扩增的结果是通过生物信息学分析得出的拷贝数变异（CNV），与FISH报告检测出的基因拷贝数（GCN）并非同一概念。
如图6所示，由于送检样本是肿瘤细胞和正常细胞的混合物，因此NGS检测分析得到的是混合物整体的CNV，不能直接作为肿瘤细胞平均的MET基因拷贝数用于临床参考。我们需要基于肿瘤细胞占比等信息换算成GCN[8]。
图6. CNV和GCN的概念区别
NGS检测MET扩增的优势有哪些？
FISH是检测MET扩增的金标准，但其只能检测肿瘤组织样本和单一变异类型。NGS的优势在于组织和液体样本均可检测，并可同时检测MET 14跳读等突变和融合等其他变异，且能实现多基因共检，最大化利用样本获得全面的基因变异信息，在临床实践中的应用越来越广泛。
2021版非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南推荐，当组织样本充足时，可考虑优先选择NGS检测。对于检测结果不能确定、有扩增信号但不典型或位于临界值时，可考虑使用FISH进行复测[9]。组织样本不可及时，可考虑使用液体样本（如胸腹水、脑脊液、血液等）进行NGS检测（图7）。
图7. 非小细胞肺癌MET扩增检测路径参考
内容总结
MET扩增是原发肿瘤重要的驱动变异，也是EGFR‐TKI等耐药的重要机制之一，可作为晚期患者耐药后联合靶向治疗的潜在分子标志物；
MET扩增需要区分局部扩增和多体两种不同的形式，其中局部扩增相对于多体，更有可能是肿瘤发生、发展和治疗的重要因素；
FISH是检测MET扩增的金标准，但并不适用于组织样本难以获取的患者。同时，FISH单基因扩增检测的特点，使得其无法全面而高效地探索经TKI治疗后复杂的耐药机制；
NGS已成为检测MET扩增的重要工具，能同时实现组织和血液、胸腹水、脑脊液等液体样本的检测，且可以同步检测多个基因的突变、扩增和融合等变异类型，临床应用愈加广泛。
参考文献
[1]中华医学会病理学分会,国家病理质控中心,中华医学会肿瘤学分会肺癌学组,等.非小细胞肺癌MET临床检测中国专家共识.中华病理学杂志, 2022, 51 (11): 10.
[2] Guo R, Luo J, Chang J, Rekhtman N, Arcila M, Drilon A. MET-dependent solid tumours-molecular diagnosis and targeted therapy. Nat Rev Clin Oncol. 2020;17 (9): 569-587.
[3] Ahn M, Mendoza MJ, Pavlakis N, et al. Asian Thoracic Oncology Research Group (ATORG) Expert Consensus Statement on MET Alterations in NSCLC: Diagnostic and Therapeutic Considerations. Clin Lung Cancer. 2022; 23 (8): 670-685.
[4] Clavé S, Salido M, Rocha P, et al. Identification of MET gene amplifications using next-generation sequencing in non-small cell lung cancer patients. Ann Oncol. 2019; 30: v800.
[5] Peng LX, Jie GL, Li AN, et al. MET amplification identified by next-generation sequencing and its clinical relevance for MET inhibitors. Exp Hematol Oncol. 2021;10: 52.
[6] Hartmaier RJ, Han J‑Y, Cho BC, et al. Abstract 4897: Detection of MET‑mediated EGFR tyrosine kinase inhibitor (TKI) resistance in advanced non‑small cell lung cancer (NSCLC): biomarker analysis of the TATTON study. Cancer Res, 2019, 79 (13_Supplement): 4897‑4897.
[7] Lin X, Zheng Q, Qi W, et al. Comparison of NGS and FISH Platforms to Test MET Amplification in Chinese Lung Cancer Patients: A Prospective Study. 2023 WCLC, P1.22-11.
[8]二代测序临床报告解读专家组,张绪超,蔡林波,等.二代测序临床报告解读指引.循证医学, 2020, 20 (4): 10.
[9]中华医学会病理学分会,国家病理质控中心,中华医学会肿瘤学分会肺癌学组,等.非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南(2021版).中华病理学杂志, 2021, 50 (4): 10.
作者：长也 审核：观音头 排版：Moro
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